一 原理:
细胞质骨架是由微管(20—25nm)、微丝(5—6nm)和中间纤维(7—11nm)
构成的细胞质内的网状结构,具有支持、运动、物质运输等功能。
用适当浓度的TritonX—100处理细胞,可抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质,而仅保存骨架蛋白。经戊二醛固定,蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后,就可以在光学显微镜下观察到细胞质骨架的网状结构。(图c-3)
二 实验材料:
新鲜洋葱鳞茎的内表皮
三 实验器材:
滴管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、10mL小烧杯、显微镜
四 试剂:(点击展开)
五 操作步骤:
1.撕取洋葱鳞叶内表皮若干片,大小约1cm2,置于青霉素小瓶或小烧杯中。
2.用磷酸缓冲液(PBS)浸泡片刻。
3.吸去磷酸缓冲液,用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质,从而使骨架图像更加清晰。
4.吸去TritonX-100,用M—缓冲液洗3次,每次3分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
5.用3%戊二醛固定15—20分钟
6.用PBS洗3次,每次3分钟
7.考马斯亮蓝染色15分钟
8.蒸馏水洗2次
9.置于载玻片上,盖上盖玻片,在光学显微镜下观察。
六 实验结果:
绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。
七 讨论:
1.对实验结果的分析
2.实验中的注意事项和关键步骤
3.实验的体会和建议